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目前市面上商品化的反相色谱柱各式各样,时常让实验人员眼花缭乱,产生幸福的烦恼,很难快速选择合适的色谱柱。通常我们会从键合相类型、键合相在硅胶表面的覆盖率、是否封端、封端类型等方面去选择反相色谱柱。但是还可以从已表征色谱柱的参数,通过量化数值去快速选择合适的反相色谱柱。
色谱柱表征体系
色谱柱表征体系通过量化分析色谱柱中影响溶质保留行为的特征,对色谱柱进行分类,从而指导实际工作中色谱柱的选择。有效的色谱柱表征体系应具有以下特点:
(1)考虑了对色谱柱选择性有贡献的所有因素;
(2)每一个柱参数表征一种专属的溶质—色谱柱相互作用;
(3)能够得到大部分商业柱的色谱柱参数;
(4)对于特定色谱柱,不同实验室能够得到 可重现的色谱柱参数;
(5)在特定实验条件下测定的色谱柱参数能应用到任何流动相或任何柱温下的分离。
目前国际上比较成熟的色谱柱表征体系有4个,分别是由Snyder、Euerby、Hoogmartens和USP色谱柱工作小组领导完成。其中,由Snyder等基于反相色谱保留机制提出的疏水消除模型,理论基础较坚实,对色谱柱选择性的表征较全面,与其余3个体系的柱参数本质上并无区别,均取自代表性溶质的保留值,参数测定方法简便,实现选择相似或者不同色谱柱的目的。由于USP网站公开常用色谱柱的参数,USP方法表征的色谱参数更方便我们筛选色谱柱。
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