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随着分子生物学研究逐步普及,凝胶成像系统的需求在不断增长,不管是什么用途,凝胶成像系统的组件都是相似的:拍摄系统、带有特殊光源的暗箱、获取和分析凝胶图片的软件。
大部分凝胶成像系统提供了不同的产品特性来满足不同科学研究的需要快速发展的电子技术、光学技术和成像分析软件使成像操作越趋人性化。
凝胶成像系统的原理
凝胶成像系统是实验室常用的一种仪器,其应用范围极其广泛,可以用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的成像分析。
样品对投射或者反射光有部分的吸收,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度与样品的浓度或者质量成线性关系。
根据未知样品的光密度,通过与已知浓度的样品条带的光密度值相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统分析的基础。
采用紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀,极大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。
凝胶成像系统的应用
具体从使用分析的角度来看,凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量等生物工程常规研究。
01 分子量定量
对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。此方法也适用于对PAGE蛋白胶条带的分子量测定。
02密度定量
利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PAGE蛋白胶条带的浓度测定。
03密度扫描
在分子生物学和生物工程研究中,会利用图像分析软件对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量进行计算。
凝胶成像系统的选择
凝胶成像系统是生命科学实验室常常用到的仪器,那么要怎样选择一款好用的凝胶成像系统呢?选购凝胶成像设备时,应主要考虑以下因素:
一、CCD
CCD使用的材料一般由高感光的SEMI制成,它能把光子转换成电荷,再通过转换器将其变为可传输的数字信号,储存在系统中。所以CCD的质量包括光敏度,像素,制冷级等对凝胶成像仪来说尤为重要。
二、动态范围
动态范围实质是CCD传感器所能捕获捉到的光子明亮度与暗度的范围。动态范围参数值越高表示能检测的样品浓度范围越宽。
三、功用的多样化
随着凝胶成像技术的不断发展,凝胶成像仪的功能也逐渐变得多样化,比如蛋白质的免染成像等功能。
四、安全性和易用性
DNA凝胶电泳实验基本都涉及到带有毒性的核酸染料的使用,随着技术的不断革新,仪器安全性能大幅提升,同时操作也更简便,一键即可实现自动曝光、自动对焦、自动缩放,自动图像采集与分析。
维护保养注意事项
1、要注意保持仪器表面外周干净清洁。
2、要注意保持各样品盘的清洁,以免影响凝胶成像仪凝胶成像的效果。
3、在使用紫外光源照相的过程中,不可以打开凝胶成像系统前面板。
4、成像后将凝胶取出,并用较软的纸擦拭样品盘。
5、较长时间不用仪器时,请将仪器用防尘罩盖上。
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