高效液相色谱仪常用检测器--蒸发光散射检测器

蒸发光散射检测器（evaporative light—scattering detector，ELSD）是20世纪90年代出现的新型通用型质量检测器，它适用于检测挥发性低于流动相的组分，主要用于检测糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、甘油三酯及甾体等，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。对各物质有几乎相同的响应，但是其灵敏度比较低，尤其是有紫外吸收的组分。此外流动相必须是挥发性的，不能含有缓冲盐等。它的通用检测原理克服了常见于液相色谱传统检测方法的不足，已越来越多地应用于HPLC、超临界色谱和逆流色谱中。不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。

（1）液相色谱ELSD检测原理

ELSD运行有三个过程：第一是雾化过程，用惰性气体或净化空气将色谱柱流出物雾化；第二是蒸发过程，在一个加热管（漂移管）中将流动相挥发；第三是检测过程，测定留下来的样品颗粒的光散射。所有商品ELSD都由一种或两种模式完成这三个过程。模式A的操作是全部柱流出物（气溶胶）都进入直的漂移管，让流动相在其中蒸发，模式B中是将气溶胶通过一个弯管，在此管中大的颗粒沉积下来流入废气管，其余的小颗粒进入螺旋状的漂移管，在上述两种模式中，样品颗粒均进入光管，使激光发生散射而得以检测。

（2）液相色谱ELSD检测的优点及缺点

优点：

①具有较好的通用性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测；

②在相同色谱条件下，物理性质相似的物质可给出一致的响应；

③能与梯度洗脱方式相容;

④灵敏度高于示差折光检测器、紫外末端吸收检测法。

⑤在ELSD上开发的实验方法移植到质谱上则无需修改。

ELSD检测的不足之处主要是：

①灵敏度不够理想；

②流动相的选择受限；

③某些样品线性范围较窄等。

（3）影响液相色谱ELSD检测性能的基本因素

①操作模式选择，选择合适的操作模式可提高方法的灵敏度，操作模式的选择取决于样品的挥发性、流动相的组成及其流速。

②流动相组成及流速选择，流动相的挥发性越好，方法的灵敏度越高。流动相的流速越低，相应的信号越强。

③漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显规律性。最优温度应为在流动相基本挥发基础上，产生可接受噪音的最低温度。

④载气流速是影响检测性能的一个很重要因素。最优载气流速应是在可接受噪音的基础上（例如0.5mV），产生最大检测响应值时的最低流速。

（4）液相色谱ELSD检测时的数据处理模式

ELSD检测最常采用的数学模型是lgy=algx+b （y为响应值，x为进样量或样品浓度，a、b为回归常数），也有采用二次曲线模型的（y=ax2+bx+c）。由于响应值（y）与进样量（x）之间并非线性关系，故其数据处理不同于紫外检测方法。ELSD测定已知物质的含量时，一般应用随行标准曲线法而非外标法，因为校正线性方程的截距并不为零。新药基准品的建立，除了对照品为另外一种含量已知、结构相似的物质外，数据处理方式同上相似。ELSD测定物质纯度时，由于响应值与进样量间并非线性关系，多通过绘制其中的一种或数种物质的随行标准曲线来加以校正。多组分物质的分析，除了随行校正曲线的线性范围有所区别外，数据处理同上类似。尽管存在一些不足之处，但是ELSD作为一种新型的通用型质量检测器，具有许多独特的优势，例如它的通用性，响应因子的一致性以及与梯度洗脱相容等，将在无特征紫外吸收物质的分析方面发挥越来越重要的作用。

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