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色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。
(1)避免压力、温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或色谱柱从高处掉下都会影响柱床;柱压的突然升高或降低也会对柱床有影响,因此要缓慢升高或降低流速,阀进样时,阀的转动不宜过缓。
(2)操作时应注意逐渐改变溶剂的组成,不应直接改变溶剂的组成。
(3)色谱柱不宜反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲,否则反冲会迅速降低柱效。
(4)避免生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理,还可以在进样器和色谱柱之间连接保护柱。
(5)经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。
(6)保存色谱柱时应用乙腈或色谱柱说明书上指定的溶剂充满色谱柱,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥,绝对禁止将缓冲盐溶液留在柱内静置过夜。装在HPLC仪上柱子如不经常使用,应每隔4~5天开机冲洗15分钟。
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