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首先来看一下高效液相色谱仪期间核查中,实验室要进行那些项目的确认?
1.外观;
2.泵流量设定值误差SS与流量稳定性误差的检定SR;
3.基线噪声和基线漂移;
4.机器性能(定性、定量重复性)。
实验室如何对该4个项目的进行核查呢?
1.高效液相色谱仪外观
核查手段:现场查看仪器
2. 泵流量设定值误差SS:核查手段:现场操作并记录核查方法:分别设定流量为0.5mL/min、1.0mL/min、2.0mL/min,启动仪器,压力稳定后,在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,收集5min流出的流动相,在分析天平上称重,按式计算SS和SR。
3.高效液相色谱仪基线噪声和基线漂移核查手段:现场操作并记录;核查方法:选用C18色谱柱,以甲醇:0.02mol/L乙酸铵=5:95为流动相,流速为1.0 mL/min,紫外检测器的波长选在222nm,检测灵敏度调到最灵敏档,开机预热,待仪器稳定后记录基线10 min,由检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应标度,计算基线噪声,用检测器自身的物理量(AU)作单位表示。基线漂移用1小时内基线偏离原点的值(AU/h)表示。判断标准:基线噪声≤5×10-4AU,基线漂移≤5×10-3AU/h。
4.高效液相色谱仪机器性能(定性、定量重复性)核查手段:现场操作并记录核查方法:选用C18色谱柱,根据检测器选择流动相和测量参数:以甲醇:0.02mol/L乙酸铵=5:95为流动相,流速为1.0mL/min,紫外检测器的波长选在222nm,基线稳定后由进样器注入20µL的标准溶液,连续测量6次,记录色谱峰的保留时间和峰面积。按式计算相对标准偏差RSD。
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