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拿到一根新的色谱柱,首先要做的事情是查看色谱柱的说明书,了解色谱柱的基本信息,包括pH值范围、最高操作温度、最大操作压力等信息,再查看色谱柱柱效测试报告,准备柱效测试所用分析物及试剂,然后按以下步骤进行色谱柱活化及柱效测试:
1 液相连接二通,使用新鲜经过滤的水和乙腈或甲醇(根据测试报告中的流动相选择有机溶剂)冲洗液相系统,确保液相系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
2 将色谱柱入口端连接到液相系统上,柱出口端先不连接检测器,应直接连到废液收集器;色谱柱上有箭头标明正确方向,取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3 在0.1ml/min流速下用乙腈(甲醇)或保存溶剂润洗色谱柱,最少2小时,或按照色谱柱说明书上的方法进行活化。
4 参照柱效测试报告中的方法,更换柱效测试所用流动相,缓慢调节流速至柱效测定流速,平衡色谱柱,至少5-10倍柱体积流动相(例如:250×4.6mm 的色谱柱柱体积为 4.2 ml,以 1 ml/min 流速10倍柱体积需要平衡 42 分钟),直至压力和基线稳定。
5参照柱效测试报告中的方法测试柱效,如果测试结果略低于测试报告,属于正常情况,如果结果明显偏低、峰形拖尾,说明所使用的色谱柱或液相系统处于非理想状态,需要进行排查。
6 记录测试方法及结果,并作为定期柱效测试的参考值。
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