液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特别讲究 “正确使用” 和经验。液相工作者接触最多的是流动相，流动相是造成液相色谱各种问题的主要源头。
液相色谱仪最常见的故障一是堵，二是漏。下面就这两点分别展开讨论。（注：流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例）“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。
堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。
首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。
解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。这里有两种方式推荐：
（1）最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。
（2） 成箱购买市售品牌纯净水，如500ml 一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。
这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后有一个过滤的步骤。
从使用的实际情况来看有几点需要注意:
（1）流动相过滤实际操作时由于不可能做到专瓶专用，容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。所以用完后一定要冲洗干净。用前不放心的话也可以冲洗下。（2）流动相过滤经济成本比较高。买一套过滤装置要3000多元，且过滤器是比较容易损坏的设备。过滤片成本高，有些进口的一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。并且在使用过滤片时，有些会造成流动相的二次污染，原因在于不合格的过滤片。
（3）流动相过滤耗费时间长。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。指的是：流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。
举最简单的例子：50％的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。
从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。
但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。
"堵”的原因之三：不适当操作。
常见问题的有以下几种：
（1）在更换零件时选择的型号有误，或者管线材质不达标,接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。
（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅。
（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速升高超过警戒值.自动进样的情况类似，若六通阀卡死，也会形成死堵,导致超压 “堵”的原因讲了不少，现介绍查堵的方法。
在发生“堵”的现象后，就需要找出原因，主要是什么位置发生了“堵”。注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。
查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件（柱子除外）装上和拆下时的压力差别很大，即基本可以判定此配件堵塞。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。建议首先更换柱子,看压力是否依然很大。然后是柱前管线，依次往前排查。
下面再谈一下“漏”的问题。
液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生了漏液，那就是故障所在。
漏液的原因分两种：
（1） 接触硬件不当。
在更换零件如流路管或柱子时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的。当然选用PEEK接头是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。值得注意的是现在有很多厂家都出了手拧管线，只能用手拧,用扳手力量过大会造成损坏，所以要把握好力度，避免拧的太紧或太松。（2）使用仪器不当
如果是输送泵漏液，最常见的原因就是在活塞位置缓冲盐析出造成。之间有液体漏出、转子磨损析出的原因有两个，一是使用缓冲盐溶液时突然加入了纯甲醇而析出，这种错误很容易避免，在使用仪器时要注意目前系统的流动相是什么，如果是缓冲盐，不能直接换纯有机相，会导致盐析出，引起系统，色谱柱堵塞。需要先用10%的有机相水过度。再换纯有机相。另一原因是在用缓冲盐溶液（不论甲醇含量有多少）作流动相时，实验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相干燥形成晶体造成。为了避免此种现象出现，在使用缓冲盐做流动相后一定要先用90%的水，1ml/min 的流速来冲洗系统至少30分钟，把缓冲盐置换出去，再用纯有机相冲洗30分钟，把系统保存在纯有机相中，起到保护系统和柱子的作用。 在实际的使用过程中，试验人员往往很忙，有大量的项目要做，没时间冲洗仪器，都是拿过来就用，用完就不管了，导致问题的出现，然后排查，维修等浪费更多的时间，得不偿失。所谓磨刀不误砍柴功，工欲善其事，必先利其器。希望大家都能培养良好的使用习惯，让仪器设备能发挥出最大的作用，谢谢大家！如果您需要液相色谱仪，集思仪器从性能到品质，从售前到售后，都不会让您失望。选择武汉集思仪器设备有限公司，有了您的信任，让我们在前行的路上充满动力。咨询电话：027-87660421，400-0027-510，13006194365。
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