高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中比较常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

1、液相色谱仪柱压问题

柱压问题是使用高效液相色谱仪过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50 PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都属于柱压问题。

（1）压力过高

这是高效液相色谱仪在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。

a.首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查；

b.打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100 PSI（6.7 Bar）以下，过滤白头正常，再检查；

c.把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。

（2）压力过低

a.压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可；

b.当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5 ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

2、液相色谱仪漂移问题

主要包括基线漂移和保留时间漂移。

（1）基线漂移

一般说来，仪器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间。此外，在低波长下（220 nm）平衡时间相对会比较长。如果在实验过程中发现基线漂移，需要考虑以下原因：

a.柱温波动。

解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱；

b.流通池被污染或有气体。

解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用盐酸）；

c.紫外灯能量不足。

解决方法：更换新的紫外灯；

d.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂；

e.样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

解决方法：使用保护柱，同时，在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子；

f.检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决方法：将波长调整至最大吸收波长处；

g.流动相的PH值没有调节好。

解决方法：加适量的酸或碱调至最佳PH值。

（2）保留时间漂移

保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志。同一种物质，两次保留时间相差不要超过半分钟，超过了可看做保留时间漂移，则无法准确定性，此时需考虑以下原因：

a.温控不当。解决方法：调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱；

b.流动相比例变化。解决方法：检查四元泵的比例阀是否有故障；

c.色谱柱没有平衡。解决方法：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱；

d.流速变化。解决方法：重新设定流速 ；

e泵中有气泡。解决方法：从泵中除去气泡 。

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