二氧化碳培养箱提供了细胞生长环境,为了正确使用,根据它的结构和性能要 求,介绍培养箱正确使用方法、常见故障的预防和处理。

多数细胞培养时需37℃、5%CO2张力和饱和湿度的生长 条件,CO2培养箱提供了细胞生长环境。目前国内生物研究室 多数使用的是热导型二氧化碳培养箱, 5万～5. 5万元,使用寿命10年，但在日常的使用过程中，平均使用6.5年，其损坏原因为传感器损坏，然后正确使用根据它的结构和性能要求，无疑是让其发挥正常工作及工作年限最好的方式。

1.温度传感器保护:培养箱温度由温度传感器控制,它的 正常运行需要25℃室温条件。常规使用时,箱内放1～2支水 银温度计作为温度对照。温度传感器的正确运行,使设定温度 数、箱面显示数和箱内温度三者一致。夏季使用培养箱时,无 菌室应保持25℃左右室温。

2. 气体传感器保护:箱内气压由CO2气体传感器控制。CO2传感器正常反馈要求进气压为0. 06兆帕。 开门后,箱内 气体丢失,CO2压力下降。关门后,CO2传感器在低压刺激下 有节奏地开闭,向箱内慢慢充气,当进气压达0. 06兆帕时,自 动停止调节。换气瓶时,部分实验者针对进气压,采用加大进 气压的快速充气法,使用0. 1兆帕甚至0. 2兆铂压力,无形中 损伤了CO2传感器。开始这种损伤效应不能显示,实验者不 能察觉,反复错误操作, CO2传感器损伤累积最终致命损坏,使 气压调节失灵。当实验者发现培养基颜色变化异常、细胞生长 缓慢时,已无法挽救损坏。现将气压调节归纳为4句话17个字:反时针松捍,接 气瓶,顺时针减压,进气压0. 06。安民告示,张贴箱门,使每个实验者都会操作。为防止漏气,在气瓶出口处填胶皮,气压表 接头处缠封口带,气瓶与气压表连接后,肥皂水试验,接口无气 泡出现为连接合格。

3. CO2零点飘移监控:培养箱使用过程中, CO2气压零点 会发生自然飘移现象,这种现象不能在箱面气体显示框中表现 出来,实验者也不易觉察到飘移结果细胞培养液颜色变化异 常、细胞生长缓慢甚至死亡。CO2气压零点是否飘移,可通过CO2气体测试仪,取箱内气体检查确定。如我们测试了6台细 胞培养箱,它们的显示值都为5%,测试结果为2台箱内外气 压值一致,其余4台中箱内气压值最高18%,最低0. 5%,这些 异常气压值培养箱影响了细胞实验结果。因此,实验室应建立CO2气压零点测试制度,通常每3个月进行1次,以保证CO2气压实际使用值的正确。

4.二氧化碳培养箱饱和湿度监控: CO2培养箱使用过程中,要求在 箱内托盘中放一定量的灭菌水( 3/2至全盘) ,使箱内为饱和湿 度环境,这是针对开放培养细胞要求设计的。因为饱和湿度环 境可以避免培养液中CO2逃逸,培养液中pH值稳定,有利于 细胞生长。实际使用过程中,实验者常忘记补加水,使培养细 胞处于低湿度甚至干热环境中,培养液CO2气体易挥发,液体pH值升高,影响细胞生长。为避免此问题发生,我们采用箱 面大字警告和值日生负责制相结合的方法,能较好地落实这一 措施。此外,针对箱内湿热环境易滋生细菌等问题,我们采用 在1 000ml水中加2ml新洁尔灭液,定期用酒精和紫外线消毒 箱内空气,培养物酒精擦拭入箱内,以减少箱内微生物滋生速 度。实验多时,箱内分区存放,培养物用筐或瓷盘存放,这样存 取快速,缩短开门时间,减少箱内气体和湿度变化,节省气体,稳定了细胞生长环境。

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