液相色谱检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
01液相色谱常用检测器:紫外吸收检测器
紫外吸收(UV)检测器是目前HPLC应用最广泛的检测器。其工作原理是朗伯-比尔定律。这种检测器灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱分离。紫外吸收检测要求被检测样品组分有紫外-可见光吸收,而使用的流动相无吸收,或在被测组分吸收波长处无吸收。一般选择在欲分析物有最大吸收的波长处进行检测,以获得最大灵敏度和抗干扰能力。在没有最大吸收时,可采用末端吸收。检测波长的选择除取决于待测物质的成分和分子结构外,还必须考虑流动相组成、共存组分干扰等因素。特别是各种溶剂都有一定的透过波长下限值,超过这个波长,溶剂的吸收会变得很强,以至于不能很好地测出待测物质的吸收强度。下表列出了HPLC中一些常用的溶剂透过波长的下限。
02液相色谱常用检测器:光电二极管阵列检测器
光电二极管阵列检测器(photodiode array detector,PDAD)又称快速扫描紫外可见分光度计,是一种新型的光吸收检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件,形成多通道并行工作,同时它对光栅分离的所有波长的光信号进行检测,然后将其入射到阵列接收机,然后快速扫描二极管阵列来采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(L)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据,从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。计算机化的数据处理,还可进行色谱峰光谱相似性比较、峰纯度检测及利用谱图库对样品进行检索等,为定性、定量分析提供更丰富的信息。
单光束二极管阵列检测器,光源发出的光先通过检测池,透射光由全息光栅色散成多色光,射到阵列元件上,使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号用电子学的方法快速扫描提取出来,每幅图像仅需要10ms,远远超过色谱流出峰的速度,因此可随峰扫描。
03液相色谱常用检测器:荧光检测器
荧光检测器(fluorescence detector,FD)是一种高灵敏度、有选择性的检测器,可检测能产生荧光的化合物。荧光检测器的原理与荧光分析法相同,化合物受紫外光激发后,发射出比激发光波长更长的光,称为荧光或发射光。许多药物和生命活性物质具有天然荧光,能直接检测,某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物,然后进行荧光检测。其最小检测浓度可达0.1ng/mL,适用于痕量分析。一般情况下,荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级,但其线性范围不如紫外检测器宽。近年来,采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比,因而具有很高的灵敏度,在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。
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