紫外分光光度计是实验室常用的定性、定量仪器,是我们检测及科研必不可少的设备,但是在使用的过程中,你真的你了解它吗?
一、仪器的预热问题
在一般分光光度计的使用说明书上,要求仪器预热时间约20分钟;若是带微处理器的分光光度计,开机后仪器自动进入自检(初始化)状态,约需10分钟左右。
在分光光度计预热这个环节上,很多使用者或多或少存在问题,如开机只预热电路系统(不调节波长、打开吸收池暗箱盖预热等)或认为初始化过程就是预热等等。
对带微处理器有自检功能的分光光度计,开机后仪器自检(初始化)结束后,在测定窗口上,设置所需波长值,用一个吸收池装上纯净水置于光路上,调“0000A”后,预热仪器,当仪器显示读数不再变化后即可进行测定。
对于紫外可见分光光度计,由于有双光源(钨灯与氘灯),为了延长灯的使用寿命,开机自检完成后可以关掉测定时不用的光源灯。
二、吸光度测定重复性的问题
分光光度计在测定过程中,发现同一个溶液在不同时间里其测定结果不同,即重复性不好,其原因是什么?排除测定错误因素外,可能原因有:
(1)仪器预热时间不够或预热方法不对所造成,应延长预热时间或采用正确的预热方法。
(2)光电转换器(如光电管)因长时间使用其光电转换 效率发生了变化导致。这时标准溶液与待测溶液的吸光度都 同样变低,在相对定量时对结果影响很小。但是对这类仪器,一般建议连续使用时间不应超过3h,若需长时间使用,最好间歇30min。
三、比色皿
样品室的主要作用就是放置样品,液体测试一般使用比色皿,比色皿分为石英和玻璃两种,玻璃比色皿主要用于可见区(320nm-2500nm),在紫外区有吸收,不适用于紫外区,石英比色皿可以用于紫外可见近红外区(190nm-2500nm),另外有些透明有机玻璃也可以用作吸收池。
1、如何区分比色皿
(1)比色皿上方通常会有字母标识,各型号标识稍有差别,玻璃比色皿口沿处有“G”(Glass玻璃),而石英比色皿口沿处有“Q”(Quartz石英)或者“S”(Silicide石英玻璃)。
(2)使用紫外可见光分光光度计来鉴别玻璃、石英比色皿:现行国家检定规程规定石英比色皿在250nm下吸光度应小于0.07abs,若吸光度大于0.07abs则为玻璃比色皿。
2、如何配对比色皿使用需要配对的比色皿,在可适用的相同波长下,以空气或者纯水为介质,使用透光率T进行测量,将每组比色皿中的一只透射率调为100%,然后测量另外一只透光率,凡透射率之差不超过0.5%T,即可配对使用。
3、如何清洗比色皿比色皿是分析过程中对结果有很大影响的一个因素,比色皿污染之后对测试的影响更大,会使测试不稳定甚至结果不准,因此完成样品测定之后,必须彻底清洗比色皿,下列清洗流程仅供参考:蒸馏水清洗——乙醇清洗——干燥。
如果比色皿被污染,请按照如下流程清洗:在洗涤剂中浸泡约10min(30-50℃)——蒸馏水清洗——再加有少量双氧水的稀硝酸中浸泡约30min——蒸馏水清洗——干燥。(如果比色皿被有机物污染,请先用如丙酮等有机溶剂将有机物洗去并用蒸馏水清洗。)
值得注意的是,分析实验常用的铬酸洗液不宜用于比色皿洗涤,这是因为带水的比色皿在该洗液中可能会产生热量,致使比色皿胶接面裂开而损坏。同时经洗液洗涤后的比色皿还可能残存微量铬(铬在紫外区有吸收),因此会影响实验的测定。
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